En experimentos largos, con numerosos pasos de incubación en diversas soluciones, es posible que los cortes se desprendan de los portaobjetos, con la consiguiente pérdida de la muestra. Para evitarlo se recubren los portaobjetos con sustancias adhesivas que mantienen las secciones adheridas. Entre las más baratas y fáciles de preparar está el recubrimiento de los portaobjetos con una solución de gelatina y alumbre de cromo y potasio.
Los portaobjetos antes de ser introducidos en la solución con gelatina tienen que estar libres de toda grasa puesto que si hay restos en el portaobjetos la solución no quedará adherida a la zona con la grasa, el recubrimiento no será homogéneo, y las secciones se colocadas sobre esa región podrían desprenderse.
Procedimiento
1) Añadir 200 ml de agua destilada en un vaso de precipitado y calentar hasta 60 ºC en un agitador-calefactor. Agitar con un agitador magnético.
2) Añadir 1 g de gelatina y dejar disolver.
3) Añadir 0.1 g de alumbre de cromo y potasio y dejar disolver. La solución se tornará de un color azul pálido.
El alumbre de cromo y potasio recubrirá los portaobjetos con cargas positivas y atraerá a las secciones, las cuales tienen carga neta negativa.
4) Verter la solución transparente en una cubeta previamente calentada a 60 ºC.
5) Sumergir los portaobjetos de 3 a 5 veces durante 5 a 10 segundos cada vez. Es conveniente hacerlo hasta que no queden burbujas adheridas a los portaobjetos.
6) Sacar los portaobjetos y dejar escurrir durante unos minutos sobre un papel de filtro. Se pueden dar unos pequeños golpes sobre el papel de filtro para que escurran mejor.
7) Colocar los portaobjetos en una estufa a 37 ºC durante toda la noche para su secado. Es conveniente que los portaobjetos no estén en contacto unos con otros para evitar que queden gotas de solución por capilaridad.
8) Guardar los portaobjetos en una caja seca y libre de polvo hasta su uso.
Consejos
Los portaobjetos han de ser desengrasados previamente (ver protocolo)
La solución de gelatina/alumbre de cromo y potasio se puede almacenar a 4-8 ºC durante varios días y usarse cuando se precise. Antes de cada uso, la solución ha de estar transparente, llevarse a temperatura ambiente y filtrarse. Tras ello se lleva a 60 ºC y se sumergen los portaobjetos.
Se pueden añadir unas gotas de timol durante la preparación de la solución de la solución de gelatina/alumbre de cromo y potasio para preservarla durante más tiempo.
Cuando se van a tratar numerosos portaobjetos es recomendable calentarlos previamente para que la temperatura de la solución no disminuya durante el proceso.
Productos
Gelatina
Alumbre de cromo y potasio (CrK(SO4)2 · 12H2O)
Agua destilada
Material
Portaobjetos
Agitador magnético-calentador
IImán agitador
Termómetro
Cestas para portaobjetos
Cubeta de cristal
Estufa
