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Atlas de histología vegetal y animal
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Técnicas histológicas. Protocolos.
PORTAS ADHESIVOS CON GELATINA
En experimentos largos, con numerosos pasos de incubación en diversas soluciones, es posible que las secciones se despeguen de los portaobjetos, con la consiguiente pérdida del material. Para evitarlo se recubre a los portaobjetos con sustancias adhesivas que mantengan las secciones adheridas. Entre las más baratas y fáciles de preparar está el recubrimiento de portaobjetos con una solución de gelatina y alumbre de cromo y potasio.
- 1) Añadir 200 ml de agua destilada en un vaso de precipitado y calentar hasta 60 ºC en un agitador-calefactor. Agitar con un agitador magnético.
- 2) Añadir 1 g de gelatina y dejar disolver.
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3) Añadir 0.1 g de alumbre de cromo y potasio y dejar disolver. La solución se tornará de un color azul pálido.
El alumbre de cromo y potasio recubrirá los portaobjetos con cargas positivas y atraerá a las secciones, las cuales tienen carga neta negativa.
- 4) Verter la solución en una cubeta previamente calentada a 60 ºC
- 5) Sumergir los portaobjetos de 3 a 5 veces durante 5 a 10 segundos cada vez.
- 6) Sacar los partaobjetos y dejar escurrir durante unos minutos sobre un papel de filtro. Se pueden dar unos pequeños golpes sobre el papel de filtro para que escurran mejor.
- 7) Colocar los portaobjetos en una estufa a 37 ºC durante toda la noche para su secado.
- 8) Guardar los portaobjetos en una caja seca y libre de polvo hasta su uso.
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Consejos
Los portaobjetos han de ser desengrasados previamente (ver protocolo)
La solución de gelatina/alumbre de cromo y potasio se puede almacenar a 4-8 ºC durante varios días y usarse cuando se precise. Antes de cada uso, la solución ha de estar transparente, llevarse a temperatura ambiente y filtrarse. Tras ello se lleva a 60 ºC y se sumergen los portaobjetos.
Se pueden añadir unas gotas de timol durante la preparación de la solución de la solución de gelatina/alumbre de cromo y potasio para preservarla durante más tiempo.
Cuando se van tratar numerosos portaobjetos es recomendable calentarlos previamente para que la temperatura de la solución no disminuya durante el proceso.
- Gelatina
- Alumbre de cromo y potasio
(CrK(SO4)2 · 12H2O) - Agua destilada
- Portaobjetos
- Agitador-calentador
- Agitador magnético
- Termómetro
- Cestas para portaobjetos
- Cubeta de cristal
- Estufa
