Esta tinción se usa para destacar el tejido muscular y el tejido conectivo propiamente dicho.
Procedimiento
Protocolo puesto a punto por Elisa Inés Sánchez.
Partimos de muestras que que han sido fijadas en formol o Bouin e incluidas en parafina. Estas muestras se han cortado en secciones de unas 8 µm y adheridas a portaobjetos recubiertos con gelatina.
1. 2x10 min en xileno para desparafinar
2. 2x10 min en etanol 100º
3. 10 min en etanol 96º
4. 10 min en etanol 80º
5. 10 min en etanol 50º
6. 5 min en agua destilada.
7. 1 h en líquido de Bouin a 56-60 ºC, o 24 h a temperatura ambiente.
La solución de Bouin actúa como mordiente.
8. Varios lavados en agua destilada hasta que desaparezca el color amarillo.
9. 10 min en hematoxilina de Weigert.
Si la solución es vieja puede ser necesario incrementar el tiempo de tinción.
10. 5-10 min en agua corriente.
Si las muestras pierden su color o se tiñen débilmente, se puede volver a la Hematoxilina de Weigert durante 5 minutos más. Se puede comprobar la tinción mirando por el microscopio.
11. 15 min en solución tricrómica.
Solución tricrómica:
0.6 g cromo2R (CI 16570).
0.3 g verde luz (CI 42095).
0.8 g ácido fosfotúngstico.
1 ml ácido acético glacial.
Enrasar hasta 100 ml con agua destilada.
12. 1 min en ácido acético al 1 %.
Este es un paso de diferenciación. Si las muestras no están bien teñidas o no hay suficiente coloración roja en la muestra, las secciones se pueden dejar más tiempo en la solución tricómica.
13. 30 s en agua destilada
14. 1 min en etanol 100º
15. 1 min en etanol 100º
16. 2 min en xileno
16. 3 min en xileno
17. Montado de las secciones
Resultados
Colágeno: verde oscuro-celeste.
Músculo: rojo.
Citoplasma: rosado.
Núcleos: negro.
Consejos
La hematoxilina férrica de Weigert como solución de trabajo no debe estar más de 10 días preparada, dado que pierde efectividad. También es recomendable filtrarla antes de ser utilizada, para evitar posibles artefactos.
La solución tricómica debe tener un pH de 2, para una mejor tinción.
La diferenciación con el ácido acético se puede hacer con menos concentraciones de acético para controlar mejor la diferenciación.
La deshidratación final debe ser rápida para que no se pierda el colorante.
Productos
Xileno
Etanol de 50º, 70º, 80º, 90º, 96º y 100º
Cromo2R (CI 16570)
Verde luz (CI 42095)
Ácido fosfotúngstico
Ácido acético glacial
Material
Cubetas de tinción
Cesta para portas
Vasos de precipitado
Agitador magnético
Botes para colorantes
Cubreobjetos
