La tinción con el colorante azul de toluidina se puede usar para conseguir tinciones rápidas de tejidos animales. Es muy fácil de preparar y el tiempo de tinción es muy corto. Además, produce una reacción metacromática, es decir, es capaz de dar color diferente a diferentes estructuras. El color va desde verde brillante hasta púrpura, pasando por una gama de azules.
Procedimiento
Partimos de muestras que que han sido fijadas e incluidas en parafina. Estas muestras se han cortado en secciones de unas 8 µm y adheridas a portaobjetos recubiertos con gelatina.
1. 2x10 min en xileno para desparafinar
2. 2x10 min en etanol 100º
3. 10 min en etanol 96º
4. 10 min en etanol 80º
5. 10 min en etanol 50º
6. 5 min en H2O destilada
7. 30 s en azul de toluidina (C.I. 52040) 0.5 % en H2O destilada + 1 % de ácido acético glacial.
8. 10 s en etanol 96º con agitación
9. 2 x 10 s en etanol 100º con agitación
10. 2 min + 5 min en xileno
11. Montado con medio de montaje
Resultados
Núcleos: azules
Carbohidratos: azul o púrpura.
Citoplasma, ARN: azul o verde brillante.
Consejos
La intensidad de la tinción depende sobre todo de los tiempos de deshidratación, que han de ser muy rápidos y con agitación suave para acelerar el intercambio de líquidos en el tejido.
Se puede añadir un paso de molibdato amónico al 0.5 % en H2O destilada durante 5 min antes de los alcoholes de deshidratación. El molibdato hace que el colorante no se pierda con tanta facilidad durante la deshidratación.
Productos
Xileno
Etanol de 50º, 70º, 80º, 90º, 96º y 100º
Azul de toluidina (C.I. 52040)
Ácido acético glacial
Molibdato amónico
H2O destilada
Medio de montaje
Material
Cubetas de tinción
Cesta para portas
Cubreobjetos
