Atlas de histología vegetal y animal

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Técnicas. Protocolos

TINCIÓN

AZUL de TOLUIDINA

Tejidos vegetales

El azul de toluidina es un colorante que se usa para tinciones rápidas en histología vegetal. Es muy fácil de preparar y el tiempo de tinción es muy corto. Además, produce una reacción metacromática, es decir, es capaz de dar color diferente a diferentes estructuras. El color va desde verde brillante hasta púrpura, pasando por una gama de azules.

Las tinciones generales para tejidos vegetales se usan habitualmente en los laboratorios de histología para ver la calidad de las muestras de tejido y de las estructuras que contienen. Aunque en este caso se usa un solo colorante, otras tinciones generales combinan más de uno, como la tinción de safranina y azul alcián.

Procedimiento

Partimos de muestras que que han sido fijadas e incluidas en parafina. Estas muestras se han cortado en secciones de unas 8 µm y adheridas a portaobjetos recubiertos con gelatina.

1.- 2x10 min en xileno para desparafinar

2.- 2x10 min en etanol 100º

3.- 10 min en etanol 96º

4.- 10 min en etanol 80º

5.- 10 min en etanol 50º

6.- 5 min en H2O destilada

7.- 30 s en azul de toluidina 0,5 % en H2O destilada

8.- 3x10 s en H2O destilada con agitación

9.- 10 s en etanol 96º con agitación

10.- 2 x 10 s en etanol 100º con agitación

11.- 2 min + 5 min en xileno

12.- Montado con medio de montaje

Resultados

Paredes celulares primarias delgadas: azul a púrpura.

Paredes celulares secundarias: verde brillante.

Cutícula madura: verde brillante.

Consejos

Quizá lo más destacable de esta tinción es la rapidez con se hacen los pasos que van tras el colorante y hasta el segundo paso de xileno. El tiempo en el colorante y los segundos en cada uno de los pasos posteriores determinarán la intensidad de la tinción. Es conveniente procesar los portaobjetos uno a uno, puesto que hay que agitarlo lentamente con la mano como si se estuviera removiendo un líquido con una cucharilla en la que el portaobjetos hace de cuchara, o sumergiendo y sacando el portaobjetos de la solución.

Productos

Xileno

Etanol de 50º, 70º, 80º, 90º, 96º y 100º

Azul de toluidina al 0.5 % en H2O destilada

H2O destilada

Medio de montaje

Material

Cubetas de tinción

Cesta para portas

Cubreobjetos

Azul de toluidina
Sección de una espina de un tojo. Nótese el color verde brillante en la cutícula y el azul claro de las fibras de esclerénquima, mientras que las paredes de las células parenquimáticas aparecen de color púrpura-violeta.
Azul de toluidina Azul de toluidina
Secciones de azul de toluidina, izquierda, y safranina-azul alcián, derecha. Planta: tojo.
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Actualizado: 29-07-2019. 13:27