El un reactivo de Schiff es utilizado en la tinción de PAS-hematoxilina. Es un compuesto preparado a partir de fucsina básica (clorohidrato de pararosanilina), ácido clorhídrico y metabisulfito sódico o potásico. Se utiliza tradicionalmente para detectar polisacáridos, más concretamente grupos aldehídos que se crean en sus moléculas durante el proceso de tinción (ver el protocolo de la tinción de PAS-Hematoxilina). Hay varias maneras de preparar el reactivo de Schiff según se describe en el libro de Martoja y Martoja "Initiations aux techniques de l'hisotlogie animale", Pierson 1970 (Edición en español de 1970, Toray-Masson).
Procedimiento
Método de Coleman
Agua hirviendo ... 200 ml
Fucsina básica (clorhidrato de pararosanilina) ... 1 g
Dejar enfriar tras la disolución
Metabisulfito potásico ... 2 g
Ácido clorhídrico normal ... 10 ml
Al cabo de 24 h se añade:
Carbón activo ... 0.5 g
Agitar vigorosamente durante 1 min, dejar sedimentar y filtrar
Método de Lillie
Fucsina básica ... 1 g
Metabisulfito sódico ... 1.9 g
Áido clorhídrico ... 100 ml a 0.15 N
Dejar que la solución se decolore agitando de vez en cuando. Cuando haya una casi total decoloración (12 a 24 h) se continúa con la receta
Carbón activo ... 0.5 g
Agitar vigorosamente durante 1 min, dejar sedimentar y filtrar
Método de Graumann
Fucsina ácida ... 0.5 g
Metabisulfito potásico ... 0.5 g
Ácido clorhídrico ... 15 ml a 1 N
Agua destilada ... 85 ml
Mezclar las soluciones, dejar sedimentar durante 24 h. Cuando se alcance una decoloración casi total se sigue con la receta
Carbón activo ... 0.5 g
Agitar vigorosamente durante 1 min, dejar sedimentar y filtrar
Consejos
Independientemente del método de preparación del reactivo de Schiff, la solución debe conservarse en la oscuridad en un frasco cerrado herméticamente. Es conveniente conservarlo en un frigorífico. Antes de cada uso comprobar que el reactivo desprende un olor sulfuroso. De lo contrario añadir 1 gota de ácido clorhídrico concentrado y unos decigramos de metabisulfito sódico o potásico.
Productos
Fucsina básica
Metabisulficto sódico
Metabisulfito potásico
Ácido clorhídrico
Carbón activo
Agua destilada
Material
Probeta
Balanza
Agitador magnético / placa térmica
Vasos de precipitado
Botellas con cierre hermético
Papel de aluminio para mantenerlo en oscuridad
Nevera para su conservación
