El Bouin es una mezcla fijadora propuesta por Pol Andre Bouin a finales del siglo XIX. Es muy utilizada en histología en tejidos que va a ser incluidos en parafina y para la realización de tinciones comunes, por ejemplo en histopatología. Es aconsejada para tejidos blandos y embriones, y preserva bien el núcleo y el glucógeno. También actúa como mordiente que ayuda a la tinción con determinados colorantes. Su capacidad fijadora se basa en la acción del ácido pícrico, que provoca precipitación de moléculas, y del formaldehído, que forma entrecruzamientos entre proteínas del tejido.
Procedimiento
Solución saturada de ácido pícrico ... 15 partes
Formol ... 5 partes
Ácido acético ... 1 parte
Solución saturada de ácido pícrico: añadir ácido pícrico sólido a un litro de H2O destilada. Dejar disolver durante un día o dos de manera que el agua se sature y aún permanezca parte el ácido pícrico sólido añadido en el fondo. Una vez saturada el H2O con el ácido pícrico se coge el volumen necesario para preparar la solución fijadora, con cuidado de no remover el fondo donde se encuentra el ácido pícrico sólido no disuelto.
Se puede añadir un volumen de H2O destilada igual al sacado tras cada uso, siempre que quede ácido pícrico sólido en el fondo del recipiente. Si éste desaparece se añade más ácido pícrico sólido.
La solución saturada de ácido pícrico se puede mantener durante meses.
Formol: formaldehído al 37-40 % en H2O destilada.
Consejos
La solución de Bouin se puede mantener almacenada mucho tiempo, siempre que esté herméticamente cerrado el recipiente que la contiene.
Hay que tener cuidado con el tiempo de fijación, que no se recomienda exceda de 48 h en el caso de fijaciones por inmersión. Tras la fijación las muestras de tejido se pueden conservar en alcohol de 70°. No está recomendado para el riñón ni para el estudio de mitocondrias.
Antes de la inclusión en parafina es conveniente eliminar el ácido pícrico de la muestra mediante lavados en etanol de 70° porque puede impedir una buena inclusión o provocar que las tinciones no sean adecuadas.
Ver la hoja de seguridad del ácido pícrico puesto que puede ser explosivo bajo ciertas circunstancias.
Productos
Formol
Ácido pícrico
Ácido acético
Agua destilada
Material
Probeta
Bote con cierre hermético
Vaso de precipitado
