Atlas de histología vegetal y animal

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Técnicas histológicas. Protocolos.

TINCIÓN: PAS y HEMATOXILINA

Este método de tinción se emplea para detectar polisacáridos en los tejidos, tanto glucógeno como mucopolisacáridos. También es una buena tinción para membranas basales y cartílago. Cualquier fijador es apropiado para esta técnica.

El mecanismo de coloración de la tinción de PAS no sólo por afinidad eléctrica, como los colorantes habituales, sino que es una tinción histoquímica, es decir, se realiza una modificación química del tejido previa a la coloración. Es el ácido peryódico quien lleva a cabo esta reacción.

Procedimiento

Partimos de muestras que que han sido fijadas e incluidas en parafina. Estas muestras se han cortado en secciones de unas 8 µm y adheridas a portaobjetos recubiertos con gelatina.

1.- 2x10 min en xileno para desparafinar

2.- 2x10 min en etanol 100º

3.- 10 min en etanol 96º

4.- 10 min en etanol 80º

5.- 10 min en etanol 50º

6.- 5 min en H2O destilada

7.- Ácido peryódico al 0.5 % durante 5 min
Se oxidan las uniones carbono-carbono de los azúcares para formar grupos aldehídos.

8.- varios lavados en H2O destilada

9.- Reactivo de Schiff durante 30 min en oscuridad (el tiempo depende de la temperatura)
Los grupos aldehídos reaccionan con el reactivo de Schiff (ácido sulfuroso con fucsina) resultando en un color rojo fucsia. Las secciones quedan de un color rosado intenso.
Se puede dar un paso con una solución de metabisulfito potásico (o sódico) durante 2 minutos para eliminar los residuos de reactivo de Schiff de la muestra.

10.- 5 min en agua corriente

11.- Varios lavados en H2O destilada

12.- 5 min en hematoxilina de Mayer

13.- 15 min en agua corriente

14.- 20 s en H2O destilada

15.- 5 min en etanol 80º

16.- 5 min en etanol 96º

17.- 2x10 min en etanol 100º

18.- 2x10 min en xileno

19.- Montado con medio de montaje

Resultados

Glúcidos: rosa intenso a fucsia

Núcleos: azul oscuro (en realidad se tiñe sólo la cromatina)

Consejos

El tiempo en reactivo de Schiff depende de la temperatura. Incluso se puede teñir en microondas durante menos de un minuto.

El reactivo de Schiff puede reutilizarse pero ha de conservarse en nevera y llevarlo a la temperatura deseada antes de su uso.

El reactivo de Schiff debe conservar un color amarillento y hay que descartarlo si se vuelve de color rosado. Si aparece precipitado blanco en el fondo del bote de reactivo se puede disolver de nuevo.

Productos

Xileno

Etanol de 50º, 70º, 80º, 90º, 96º y 100º

Ácido peryódico al 5 %

Reactivo de Schiff

Hematoxilina de Mayer

H2O destilada

Agua corriente

Medio de montaje

Material

Cubetas de tinción

Cesta para portas

Cubreobjetos

Estufa

PAS-hematoxilina
Secciones de parafina de 8 µm de grosor teñidas con hematoxilina y eosina (A) y con PAS y hematoxilina (B). Las secciones pertenecen a campos similares del digestivo. La tinción de fucsia corresponde al reactivo de Schiff, el cual marca mucopolisacáridos de las células caliciformes.
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Actualizado: 29-07-2019. 13:27