Este método de tinción se emplea para detectar polisacáridos en los tejidos, tanto glucógeno como mucopolisacáridos. También es una buena tinción para membranas basales y cartílago. Cualquier fijador es apropiado para esta técnica.
El mecanismo de coloración de la tinción de PAS no sólo es por afinidad eléctrica, como los colorantes habituales, sino que es una tinción histoquímica, es decir, se realiza una modificación química del tejido previa a la coloración. Es el ácido peryódico quien lleva a cabo esta reacción histoquímica.
Procedimiento
Partimos de muestras que que han sido fijadas e incluidas en parafina. Estas muestras se han cortado en secciones de unas 8 µm y adheridas a portaobjetos recubiertos con gelatina.
1.- 2x10 min en xileno para desparafinar
2.- 2x10 min en etanol 100º
3.- 10 min en etanol 96º
4.- 10 min en etanol 80º
5.- 10 min en etanol 50º
6.- 5 min en H2O destilada
7.- Ácido peryódico al 0.5 % en H2O destilada durante 5 min
En este paso se oxidan las uniones carbono-carbono de los azúcares para formar grupos aldehídos.
8.- Varios lavados en H2O destilada
9.- Reactivo de Schiff durante 30 min en oscuridad (el tiempo depende de la temperatura)
Los grupos aldehídos reaccionan con el reactivo de Schiff (ácido sulfuroso con fucsina) resultando en un color rojo fucsia. Las secciones quedan de un color rosado intenso.
Se puede dar un paso con una solución de metabisulfito potásico (o sódico) durante 2 minutos para eliminar los residuos de reactivo de Schiff de la muestra.
10.- 5 min en H2O corriente
11.- Varios lavados en H2O destilada
12.- 5 min en hematoxilina de Mayer
13.- 15 min en H2O corriente
14.- 20 s en H2O destilada
15.- 5 min en etanol 80º
16.- 5 min en etanol 96º
17.- 2x10 min en etanol 100º
18.- 2x10 min en xileno
19.- Montado con medio de montaje
Resultados
Carbohidratos: rosa intenso a fucsia
Núcleos: azul oscuro (en realidad se tiñe sólo la cromatina)
Consejos
El tiempo en reactivo de Schiff depende de la temperatura. Incluso se puede teñir en microondas durante menos de un minuto.
El reactivo de Schiff puede reutilizarse pero ha de conservarse en nevera y llevarlo a la temperatura deseada antes de su uso.
El reactivo de Schiff debe conservar un color amarillento y hay que descartarlo si se vuelve de color rosado. Si aparece precipitado blanco en el fondo del bote de reactivo se puede disolver de nuevo.
Productos
Xileno
Etanol de 50º, 70º, 80º, 90º, 96º y 100º
Ácido peryódico al 5 % en H2O destilada
Reactivo de Schiff
Hematoxilina de Mayer
H2O destilada
H2O corriente
Medio de montaje
Material
Cubetas de tinción
Cesta para portas
Cubreobjetos
