El protocolo de impregnación de nitrato de plata se utiliza para poner de manifiesto tractos de fibras y cuerpos celulares en el sistema nervioso. La técnica se realiza sobre muestras de cerebro o médula espinal de unos milímetros de espesor.
Procedimiento
En esta técnica es importante el fijador usado.
1. Fijador. 16-18 h en nevera por inmersión.
Hidrato de cloral 4 g
Etanol 100º 20 ml
H2O destilada 25 ml
Amoniaco para ajustar el pH a 8.6
2. Etanol 100º 24 h.
3. Nitrato de plata 1.5 % en H2O destilada 5 días a 37 ºC en oscuridad.
4. H2O destilada, dos lavados de 30 segundos.
5. Reducción. 24 h a temperatura ambiente.
Hidroquinona 0.5 g
H2O destilada 40 ml
Formol 3.5 ml
6. Etanol 70º 3 x 1 min.
7. Inclusión del cerebro o muestra del sistema nervioso central en parafina (ver protocolo ↗).
8. Secciones a 10 µm de grosor.
9. Eliminación de parafina e hidratación con tiempos cortos, no más de 5 min en cada paso.
Se puede dar un contraste con hematoxilina durante la hidratación para resaltar los núcleos de las neuronas y glía, y así ver los tractos de fibras en el contexto de las diferentes regiones nerviosas.
10. Deshidratación en ethanol, xileno y montaje.
La deshidratación debe ser rápida, no más de 5 min por alcohol y líquido intermediario. El medio de montaje puede afectar a la calidad de la impregnación. Un buen resultado se consigue mediante el uso como medio de montaje a resinas tipo epoxy (empleadas en las inclusiones para microscopía electrónico) y como líquido intermediario al óxido de propileno. En estos casos hay que solidificar el medio de montaje mediante polimerización a 60 ºC durante 24 h.
Resultados
Neuronas: marrón pálido con nucléolo patente.
Fibras (axones): negro, marrón.
Consejos
Los resultados son muy variables, es recomendable usar productos de buena calidad.
El tiempo de reducción es variable y se decide terminarlo en función del color de la pieza.
No es recomendable usar piezas muy grandes, no más de 1 centímetro de tamaño.
Los procesos de eliminnación de parafina, hidratación, deshidratación y montado de secciones han de ser rápidos.
Productos
Etanol de 50º, 70º, 80º, 90º, 96º y 100º
Hidrato de cloral
Nitrato de plata
H2O destilada
Amoniaco
Hidroquinona
Formol
Óxido de propileno
Xileno
Parafina
Resina tipo epoxy
Material
Recipientes y viales
Estufa a 60 º
Estufa a 37 º
