Atlas de histología vegetal y animal

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Técnicas histológicas. Protocolos.

NITRATO de PLATA

El protocolo de impregnación de nitrato de plata se utiliza para poner de manifiesto tractos de fibras y cuerpos celulares en el sistema nervioso. La técnica se realiza sobre muestras de cerebro o médula espinal de unos milímetros de espesor.

Procedimiento

En esta técnica es importante el fijador usado.

1. Fijador. 16-18 h en nevera por inmersión.
Hidrato de cloral 4 g
Etanol 100 ºC 20 ml
H2O destilada 25 ml
Amoniaco para ajustar el pH a 8,6

2. Etanol 100 ºC 24 h.

3. Nitrato de plata 1.5 % en agua destilada 5 días a 37 ºC en oscuridad.

4. H2O destilada, dos lavados de 30 segundos.

5. Reducción. 24 h a temperatura ambiente.
Hidroquinona 0.5 g
H2O destilada 40 ml
Formol 3.5 ml

6. Etanol 70º 3 x 1 min.

7. Inclusión del cerebro o muestra del sistema nervioso central en parafina.

8. Secciones a 10 µm de grosor.

9. Eliminación de parafina e hidratación con tiempos cortos, no más de 5 min en cada paso.
Se puede dar un contraste con hematoxilina durante la hidratación para resaltar los núcleos de las neuronas y glía, y así ver los tractos de fibras en el contexto de las diferentes regiones nerviosas.

10. Deshidratación y montaje.
La deshidratación debe ser rápida, no más de 5 min por alcohol y líquido intermediario. El medio de montaje puede afectar a la calidad de la impregnación. Un buen resultado se consigue mediante el uso como medio de montaje a resinas tipo epoxy (empleadas en las inclusiones para microscopía electrónico) y como líquido intermediario al óxido de propileno. En estos casos hay que solidificar el medio de montaje mediante polimerización a 60 ºC durante 24 h.

Resultados

Neuronas: marrón pálido con nucléolo patente.

Fibras (axones): negro, marrón.

Consejos

Los resultados son muy variables, es recomendable usar productos de buena calidad.

El tiempo de reducción es variable y se decide terminarlo en función del color de la pieza.

No es recomendable usar piezas muy grandes, no más de 1 centímetro de tamaño.

Los procesos de elinación de parafina, hidratación, deshidratación y montado de secciones han de ser rápidos.

Productos

Etanol de 50º, 70º, 80º, 90º, 96º y 100º

Hidrato de cloral

Nitrato de plata

H2O destilada

Amoniaco

Hidroquinona

Formol

Óxido de propileno

Xileno

Parafina

Resina tipo epoxy

Material

Recipientes y viales

Estufa a 60 º

Estufa a 37 º

Nitrato de plata
Nitrato de plata
Nitrato de plata
Técnica de nitrato de plata en cerebro. (Imágenes cedidas por la Dra. Rosa Álvarez Otero. Depto. Biología Funcional y Ciencias de la Salud. Universidad de Vigo)
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Actualizado: 29-07-2019. 13:27