Atlas de histología vegetal y animal

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Técnicas histológicas. Protocolos

TINCIÓN de NISSL

La tinción de Nissl es muy usada en tejido nervioso, sobre todo en encéfalo y médula espinal, para estudiar la organización de las neuronas en núcleos y capas, aunque sirve para cualquier tejido. Tiñe estructuras ácidas como el núcleo y los cúmulos de ribosomas. El colorante en el que se basa la tinción es normalmente el azul de toluidina o el violeta de cresilo. El más usado es el violeta de cresilo, que es el que se describe más abajo.

En el citoplasma de las neuronas aparecen unas estructuras fuertemente teñidas con esta tinción denominadas cuerpos de Nissl, que se corresponden con acumulaciones de retículo endoplasmático rugoso. Aquí se tiñen el ARN ribosómico y el ARN mensajero que se está traduciendo.

Procedimiento

Partimos de muestras fijadas con formaldehído (fijador Bouin o paraformaldheído al 4%) e incluidas en parafina.

1.- 2x10 min en xileno para desparafinar

2.- 2x10 min en etanol 100º

3.- 10 min en etanol 96º

4.- 10 min en etanol 80º

5.- 10 min en etanol 50º

6.- 5 min en H2O destilada

7.- 5-10 min solución de violeta de cresilo (CAS: 10510-54-0) al 0.1 %.
Hay varias maneras de preparar el violeta de cresilo:
a) 0.1 g de violeta de cresilo en 100 ml de agua destilada. Justo antes de usar se añaden unas gotas de ácido acético glacial y se filtra.
b) 0.1 g de violeta de cresilo en 100 ml de agua destilada, más 0.25 ml de ácido acético glacial. Disolver a 60 ºC hasta la disolución del violeta de cresilo. Guardar en oscuridad y filtrar antes de usar.
c) Tampón acetato: Solución A: 0.6 ml de ácido acético en 100 ml de agua destilada; solución B: 1.36 g de acetato sódico en 100 ml de agua destilada. Mezclar las soluciones A y B en una proporción de 9 a 1 (9 de A y 1 de B) y ajustar el pH a 3.7. Mezclar violeta de cresilo al 1 % en agua destilada y tampón acetato en una proporción de 1:1. Filtrar y usar.
En el caso de que sean secciones gruesas se puede usar la solución con el colorante calentada a 37 ºC.

8.- Lavado rápido en H2O destilada.

9.- Diferenciar en etanol de 96º durante varios minutos y comprobar el proceso con el microscopio.

10.- 2x10 min en etanol 100º

11.- 2x10 min en xileno

15.- Montado con medio de montaje.

Resultados

Núcleos: rosa - violeta.

Retículo endoplasmático rugoso: púrpura.

Consejos

La calidad de la tinción depende del tiempo de diferenciación durante la deshidratación final, luego los tiempos en estos alcoholes afectarán al resultado final.

Si permanecen en el tejido gotas de lípidos o mielina (cortes de vibratomo, microtomo de congelación o de criostato), y no se quiere que interfieran con la tinción de los cuerpos celulares, las secciones pueden deshidratar en etanol creciente y volver a hidratar para eliminar tales lípidos.

Productos

Xileno

Etanol de 50º, 70º, 80º, 90º, 96º y 100º

Violeta de cresilo (CAS: 10510-54-0)

Ácido acético

Acetato sódico

H2O destilada

Medio de montaje

Material

Cubetas de tinción

Filtro de papel

Probeta

Botes

Cesta para portas

Cubreobjetos

Corteza dorsal
Sección de corteza dorsal de ratón teñida con violeta de cresilo.
Médula espinal
Imagen de motoneuronas de la médula espinal de rata teñidos con violeta de cresilo. Los grumos oscuros que aparecen en el citoplasma son los cuerpos de Nissl.
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