Atlas de histología vegetal y animal

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Técnicas histológicas. Protocolos.

TINCIÓN de WOELCKE

Esta tinción se usa para teñir la mielina del sistema nervioso central, aunque no sirve para la del sistema nervioso periférico. Es útil en estudios de alteraciones de los tractos nerviosos o del tejido nervioso en general. También se emplea en casos de muerte celular puesto que las neuronas degeneradas aparecen completamente negras, mientas que en las normales sólo se tiñe el núcleo.

Procedimiento

Partimos de muestras que que han sido fijadas en formol o Bouin e incluidas en parafina. Estas muestras se han cortado en secciones de unas 8 µm y adheridas a portaobjetos recubiertos con gelatina.

1. 2x10 min en xileno para desparafinar

2. 2x10 min en etanol 100º

3. 10 min en etanol 96º

4. 10 min en etanol 80º

5. 10 min en etanol 50º

6. 5 min en H2O destilada.

7. 16-18 h en solución de sulfato férrico amónico al 2,5 % en H2O destilada.
Solución de sulfato férrico amónico 2.5 g en 100 ml de agua destilada. Hay que usar el mortero para triturar y disolver bien los cristales y asegurarse de que la solución tiene un color violáceo.

8. 1,5 a 2 h en solución de trabajo de hematoxilina.
(a) Hematoxilina alcohólica: 10 g de hematoxilina en 100 ml de etanol 100º.
(b) Solución saturada de carbonato de litio: 1,45 g de carbonato de litio en 99 ml de H2O destilada.
Solución de trabajo de hematoxilina: 45 ml de H2O destilada + 10 ml de (a) + 7 ml de (b).
Preparar la solución de trabajo de hematoxilina siguiendo el orden indicado. No agitar demasiado para mezclar los 3 componentes. Esta solución se puede usar durante una semana aproximadamente.

9. Etanol de 80º hasta aclarar el fondo. El tiempo depende del proceso de aclarado del color de la tinción.

10. 5 min en etanol 96º

11. 2x10 min en etanol 100º

12. 2x10 min en xileno.

13. Montado con medio de montaje.

Resultados

Glía y nucléolo: negros.

Vainas de mielina: azul oscuro.

Neuronas en degeneración: soma negro.

Fondo: claro.

Resultados

Es importante no sobreteñir con la hematoxilina puesto que se tendría una tinción de fondo muy oscura que oculta la mielina.

Los tiempos en los alcoholes puede variar para conseguir la tinción deseada, sobre todo el etanol de 80º tras la solución de trabajo de hematoxilina.

Productos

Xileno

Etanol de 50º, 70º, 80º, 90º, 96º y 100º

Hematoxilina cristalizada (C.I. 75290)

Sulfato férrico amónico

Carbonato de litio

Medio de montaje

Material

Cubetas de tinción

Cesta para portas

Mortero

Cubreobjetos

Tinción de Woelcke
Secciones de parafina de 8 µm de grosor teñidas con la el protocolo de Woelcke, usado para resaltar las vainas de mielina en un cerebro de rata.
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Actualizado: 29-07-2019. 13:27