La hematoxilina (del griedo haimatus: sangre y xilon: madera) es un componente natural obtenido de una planta leguminosa (Haematoxylum campechianum). La hematoxilina tiene que ser oxidada a hemateína antes de ser usada como colorante y combinada con un metal que actuará como mordiente. La oxidación puede ser química o por el oxígeno mediante el envejecimiento de la solución. Es el producto oxidado de la hematoxilina, la hemateína, la que realmente se adhiere a las sustancias ácidas del tejido. Fundamentalmente tiñe el núcleo. La hematoxilina, la hemateína como colorante, es un componente de la tinción hematoxilina y eosina, probablemente la tinción general más usada en tinciones histológicas, pero también de otras tinciones como las tricrómicas donde se precisa teñir núcleos.
Hematoxilina de Weigert, o hematoxilina férrica, se utiliza para la tinción de núcleos cuando se usa a continuación una sustancia ácida. La hematoxilina se aplica junto con un mordiente que contiene aluminio potásico o aluminio amónico y por ello no se elimina en la solución ácida posterior. La hematoxilina y el mordiente se almacenan por separado y se aplican al tejido conjuntamente. El color resultante es negro o púrpura muy oscuro. La hematoxilina de Weigert se emplea en soluciones tricrómicas como el trocrómico de van Gieson.
Procedimiento
Solución A (Hematoxilina)
Hematoxilina cristalizada (C.I. 75290) ... 1 g
Etanol 960 ... 100 ml
Solución B (Cloruro de hierro)
Cloruro de hierro (III) ... 1.16 g
Ácido clorhídrico (25%) ... 1 ml
Agua destilada ... 99 ml
Consejos
Los dos componentes se almacenan por separado y se unen cuando se va a realizar la tinción. Se añade 100 ml de la solución A a otros 100 ml de la solución B, y se mezcla la solución resultante. El tiempo de tinción depende de la técnica y tejido usado.
Tras la tinción con la solución de hematoxilina, y tras lavar en agua corriente abundantemente (30 min), se pueden incubar las secciones en hidrógeno carbonato de sodio (bicarbonato de sodio) al 0,1 % en agua destilada para que los núcleos adquieran un color azulado. El tiempo para conseguir el color deseado depende de la coloración que queramos conseguir, lo cual se puede controlar mediante la observación de las secciones al microscopio.
Productos
Hematoxilina cristalizada (C.I. 75290)
Cloruro de hierro (III)
Ácido clorhídrico
Etanol 960
Agua destilada
Material
Probeta
Balanza
Agitador magnético
Vasos de precipitado
Botellas con cierre hermético
