El formaldehído es el fijador por excelencia en la mayoría de las técnicas histológicas. Se emplea como formol (formaldehído al 10%) en fijadores como el Bouin, el FFA o PLP, o sólo como formaldehído al 4 % tamponado. Es recomendable el uso de formaldehído preparado fresco para evitar su oxidación. Por ello, actualmente es frecuente usar fijadores con formaldehído al 4 % tamponado preparado a partir paraformaldehído. El paraformaldehído es un polímero de formaldehído que se obtiene sólido y que se disuelve para obtener la solución de trabajo.
Procedimiento
Paraformaldehído 4 % tamponado
4 g de paraformaldehído
25 ml de tampón fosfato 0.4 M, pH 7.4
1 o 2 gotas de hidróxido sódico 10 N
Enrasar a 100 ml con agua destilada
Preparación. Para 100 ml.
1. Calentar 60-70 ml de agua a 60 ºC en un matraz con un agitador magnético.
2. Añadir 4 g de paraformaldehído.
3. Añadir dos o tres gotas de hidróxido sódico 10 N.
4. Esperar a que la solución se vuelva transparente.
5. Filtrar.
6. Añadir 25 ml de tampón fosfato 0.4 M, pH 7.4
7. Enrasar con agua destilada hasta 100 ml.
8. Enfriar a 4-10 ºC antes de usar.
El resultado es 100 ml de formaldehído al 4% en tampón fosfato 0.1 M pH, 7.4.
Consejos
El formaldehído preserva los lípidos pero es mucho más efectivo cuando se añaden iones de calcio a la solución. El calcio disminuye la disolución de los fosfolípidos.
El formaldehído no reacciona con los carbohidratos y por ello se pueden perder cantidades importantes de glucógeno y glicosaminoglicanos.
El formaldehído tamponado se puede usar para tejidos destinados a su observación con microscopía electrónico cuando se le añade glutaraldehído (0.5-3%). En algunos casos se le puede añadir también ácido pícrico.
La calidad de la fijación se puede mejorar mediante la adición de lisina (ver fijador PLP), ciclohexilamina o fenol, con lo que se pueden conseguir calidades de tejido similares a las aportadas por el glutaradehído.
Se pueden emplear soluciones de paraformaldehído con ligeras variaciones y secuencialmente. Por ejemplo, se ha recomendado una fijación inicial de 4 % de paraformaldehído con 2 % fenol a pH 7, seguida por una fijación con los mismos componentes pero con pH 5.5.
Productos
Paraformaldehído
Hidróxido sódico 10 N
Tampón fosfato 0.4 M pH 7.4
Agua destilada
Material
Probeta
Embudo
Filtro papel
Agitador magnético
Agitador con plancha calefactora
