Es una tinción donde se combina la tinción nuclear mediante la hematoxilina férrica de Weigert con la mezcla ácido pícrico-fucsina ácida, la cual permite diferenciar cromáticamente las fibras colágenas del tejido conjuntivo.
Procedimiento
Cualquier fijador es válido para esta tinción. Las muestras se incluyen en parafina y se cortan en secciones de unas 8 μm que se adhieren a portaobjetos recubiertos con gelatina.
1. 2x10 min en xileno para desparafinar.
2. 2x10 min en etanol 100º
3.- 10 min en etanol 96º
4. 10 min en etanol 80º
5. 10 min en etanol 50º
6. 5 min en H2O destilada
7. 10 min en hematoxilina férrica de Weigert. Este colorante está formado por dos soluciones que se mezclan en el momento de la tinción (↗).
8. 5 min en H2O corriente
9. 1 min en H2O destilada
10. 4 a 5 min con picrofucsina de Van Gieson
Picrofucsina de Van Gieson
Solución A. Fucsina ácida 1%.
1 g de fucsina ácida (C.I. 75290)
100 ml de H2O destilada
Solución B. Solución acuosa saturada de ácido pícrico
Solución de trabajo.
1 ml de solución A
45 ml de solución B
La solución de trabajo se realiza en el momento de la tinción aunque se puede dejar madurar unas semanas. Según el caso, el tiempo de tinción puede variar. De cualquier manera, antes de su uso se le agregan 0.25 ml de ácido clorhídrico. Tras la coloración con esta mezcla no se debe lavar con agua normal ya que ocasiona una coloración más débil, y es por ello que se recomienda usar el agua acidificada.
11. 2 x 30 s en H2O acidificada
Preparación del H2O acidificada:
0.5 ml de ácido acético
100 ml de H2O destilada
12. 3 x 1 min en etanol 100º
13. 2 x 5 min en xileno
14. Montado con medio de montaje
Resultados
Colágeno: rojo rosado
Músculo: amarillo anaranjado
Citoplasma: amarillo anaranjado
Núcleos: negro azulado
Productos
Xileno
Etanol de 50º, 70º, 80º, 90º, 96º y 100º
Hematoxilina de Weigert (↗)
Fucsina ácida (C.I. 75290)
Ácido pícrico
Ácido acético
Ácido clohídrico
H2O destilada
Agua corriente
Medio de montaje
Material
Cubetas de tinción
Cesta para portas
Cubreobjetos
