Atlas de histología vegetal y animal

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Técnicas. Protocolos

NARANJA de ACRIDINA

El naranja de acridina es un colorante orgánico catiónico fluorescente metacromático que se utiliza para la tinción de ácidos nucleicos y compartimentos ácidos como los lisosomas. Emite luz verdosa cuando tiñe al ADN y luz más anaranjada cuando se une a ARN o tiñe compartimentos ácidos.

Procedimiento

Protocolo modificado por Zaira Salgueiro

Partimos de muestras que han sido fijadas e incluidas en parafina. Estas muestras se han cortado en secciones de unas 8 µm y se han adherido a portaobjetos recubiertos con gelatina.

1. 2x10 min en xileno para desparafinar

2. 2x10 min en etanol 100º

3. 10 min en etanol 96º

4. 10 min en etanol 80º

5. 10 min en etanol 50º

6. 5 min en H2O destilada

7. 10-20 s en naranja de acridina
Preparación de la solución de naranaja de acridina:
Naranja de acridina (CAS: 494-32-8) 26 mg
Ácido acético 2 ml
H2O destilada 98 ml

8. 1 min en alcohol salino
Preparación de alcohol salino:
NaCl 0,9 g
Etanol 100º 2 ml
H2O destilada 98 ml

9. 1 min en solución salina
Preparación de solución salina:
NaCl 0,9 g
H2O destilada 100 ml

17. Montado con una gota de glicerol y un cubreobjetos.

18. Observar con el microscopio de fluorescencia

Resultados

Núcleos: verde brillante.

Compartimentos ácidos: anaranjado-amarillento.

Consejos

Los pasos por alcohol salino y solución salina son esenciales para establecer la calidad e intensidad de la tinción.

Productos

Xileno

Etanol de 50º, 70º, 80º, 96º y 100º

Naranja de acridina (CAS: 494-32-8)

NaCl

Ácido acético

H2O destilada

Glicerol

Material

Cubetas de tinción

Cesta para portas

Cubreobjetos

Naranja de cridina
Sección de páncreas de ratón teñida con naranja de acridina. Obsérvese el contenido anaranjado de las células y los núcleos verdosos.
Naranja de cridina
Sección de pulmón de ratón teñida con naranja de acridina. Obsérvese las células teñidas de amarillo-anaranjado de la periferia, posiblemente mastocitos, y los núcleos verdes de todas las células.
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