Atlas de histología vegetal y animal


Técnicas histológicas. Protocolos.

TINCIÓN: PAS - AZUL ALCIÁN



Este método de tinción se emplea para detectar polisacáridos en tejidos, tanto glucógeno como mucopolisacáridos. También es una buena tinción para membranas basales y cartílago. Cualquier fijador es apropiado para esta técnica.

La combinación del PAS con el azul alcián nos permite distinguir a los mucopolisacáridos ácidos, teñidos con el azul alcián, del resto de mucopolisacáridos. Todos los mucopolisacáridos se tiñen con el PAS.

Procedimiento
  • Partimos de muestras que han sido fijadas e incluidas en parafina. Estas muestras se han cortado en secciones de unas 8 µm y adheridas a portaobjetos recubiertos con gelatina.
  • 1.- Xileno para desparafinar, 2x10 min.
  • 2.- Etanol 100º, 2x10 min.
  • 3.- Etanol 96º, 10 min.
  • 4.- Etanol 80º, 10 min.
  • 5.- Etanol 50º, 10 min.
  • 6.- H2O destilada, 5 min.
  • 7.- Azul alcián al 1 %, 30 min.

    Azul alcián:
    1 g de azul alcián (C.I. 74240)
    3 ml de ácido acético
    97 ml de agua destilada

  • 8.- H2O corriente, 3 min.
  • 9.- Ácido peryódico al 0.5 % en H2O destilada, 10 min.
  • 10.- H2O destilada, 3x1m.
  • 11.- Reactivo de Schiff durante 30 min en oscuridad (el tiempo depende de la temperatura y del propio reactivo; puede ser incluso 10 min).

    Los grupos aldehídos reaccionan con el reactivo de Schiff (ácido sulfuroso con fucsina) resultando en un color rojo fucsia. Las secciones quedan de un color rosado.

    Se puede dar un paso con una solución de metabisulfito potásico (o sódico) al 0.5 % durante 2 minutos para eliminar los residuos de reactivo de Schiff de la muestra.

  • 12.- H2O corriente, 5 min.
  • 13.- H2O destilada, varios lavados.
  • 14.- Hematoxilina de Mayer, 5 min (es opcional).
  • 15.- H2O corriente, 5 min (es opcional).
  • 16.- H2O destilada, 20s (es opcional).
  • 17.- Etanol 80º, 5 min.
  • 18.- Etanol 96º, 5 min.
  • 19.- Etanol 100º, 2x10 min.
  • 20.- Xileno, 2x10 min.
  • 21.- Montado con medio de montaje
  • Resultados

    Glúcidos: rosa intenso a fucsia
    Mucopolisacáridos ácidos: azul

    Consejos

    El tiempo en reactivo de Schiff depende de la temperatura y de las condiciones en las que se encuentre el propio reactivo. Incluso se puede teñir en microondas durante menos de un minuto.

    El reactivo de Schiff puede reutilizarse pero ha de conservarse en nevera y llevarlo a la temperatura deseada antes de su uso.

    El reactivo de Schiff debe conservar un color amarillento y hay que descartarlo si se vuelve de color rosado. Si aparece precipitado blanco en el fondo del bote de reactivo se puede disolver de nuevo.

Productos
  • Xileno
  • Etanol de 50º, 80º, 90º, 96º y 100º
  • Azul alcián (C.I. 74240)
  • Ácido peryódico
  • Reactivo de Schiff
  • (Opcional) Hematoxilina de Mayer
  • Ácido acético
  • H2O destilada
  • Agua corriente
  • Medio de montaje
Material
  • Cubetas de tinción
  • Cesta para portas
  • Cubreobjetos
PAS azul alcián

Sección de parafina teñida con PAS-azul alcián. Se observan mucocitos epiteliales de color azul, lo que indica que tiene sacáridos ácidos y otros rosados que son azúcares PAS positivos. La imagen proviene del epitelio de una oreja de mar (Haliotis).