Atlas de histología vegetal y animal

Técnicas histológicas. Protocolos.

NITRATO de PLATA

El protocolo de impregnación de nitrato de plata se utiliza para poner de manifiesto tractos de fibras en el sistema nervioso.

Procedimiento
  • En esta técnica es importante el fijador usado.
  • 1.- Fijador. 16-18 h en refrigerador por inmersión.
  • Hidrato de cloral 4 g
  • Etanol 100 ºC 20 ml
  • Agua destilada 25 ml
  • Amoniaco para ajustar el pH a 8,6
  • 2.- Etanol absoluto 24 h.
  • 3.- Nitrato de plata 1.5 % en agua destilada 5 días a 37 ºC en oscuridad.
  • 4.- Agua destilada, dos lavados de 30 segundos.
  • 5.- Reducción. 24 h a temperatura ambiente.
  • Hidroquinona 0.5g
  • Agua destilada 40 ml
  • Formol 3.5 ml
  • 6.- Etanol 70º 3 x 1 min.
  • 7.- Inclusión en parafina.
  • 8.- Secciones a 10 µm.

  • 9.- Desparafinado y deshidratación con tiempos cortos, no más de 5 min en cada paso.

    Se puede dar un contraste con hematoxilina durante la hidratación para resaltar los núcleos de las neuronas y glía, y así ver los tractos de fibras en el contexto de las diferentes regiones nerviosas.

  • 10.- Deshidratación y montaje.

    La deshidratación debe ser rápida, no más de 5 min por alcohol y líquido intermediario. El medio de montaje puede afectar a la calidad de la impregnación. Un buen resultado se consigue mediante el uso como medio de montaje a resinas tipo epoxy (empleadas en las inclusiones para microscopía electrónico) y como líquido intermediario al óxido de propileno. En estos casos hay que solidificar el medio de montaje a 60 ºC durante 24 h.

  • Resultados

    Neuronas: marrón pálido con nucléolo patente.
    Fibras (axones): negro, marrón.

    Consejos

    Los resultados son muy variables, es recomendable usar productos de buena calidad.

    El tiempo de reducción es variable y se decide terminarlo en función del color de la pieza.

    No es recomendable usar piezar muy grandes, no más de 1 centímetro de tamaño.

    Los procesos de desparafinado, hidratación, deshidratación y montado de secciones han de ser rápidos.

Productos
  • Etanol de 50º, 70º, 80º, 90º, 96º y 100º
  • Hidrato de cloral
  • Nitrato de plata
  • H2O destilada
  • Amoniaco
  • Hidroquinona
  • Formol
  • Óxido de propileno
  • Resina tipo epoxy
Material
  • Recipientes y viales
  • Estufa a 60 º
  • Estufa a 37 º
Nitrato de plata
Nitrato de plata
Nitrato de plata

Técnica de nitrato de plata en cerebro. (Imágenes cedidas por la Dra. Rosa Álvarez Otero. Depto. Biología Funcional y Ciencias de la Salud. Universidad de Vigo)