Atlas de histología vegetal y animal
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Técnicas histológicas. Protocolos.

TINCIÓN

HEMATOXILINA y EOSINA

AZUL ALCIÁN

Este protocolo es útil para poner de manifiesto el cartílago y es especialmente útil para diferenciar cartílago hialino articular de hueso, puesto que la matriz extracelular cartilaginosa se tiñe con el azul alcián. Pero también se usa para teñir células mucosas como las del epitelio digestivo o las de las glándulas mucosas de las glándulas salivares.

Hematoxilina
Hematoxilina
Procedimiento
  • Protocolo modificado por Elisa Inés Sánchez
  • Partimos de muestras que que han sido fijadas e incluidas en parafina. Estas muestras se han cortado en secciones de unas 8 µm y adheridas a portaobjetos recubiertos con gelatina.
  • 1.- 2x10 min en xileno para desparafinar
  • 2.- 2x10 min en etanol 100º
  • 3.- 10 min en etanol 96º
  • 4.- 10 min en etanol 80º
  • 5.- 10 min en etanol 50º
  • 6.- 5 min en H2O destilada
  • 7. Azul Alcian pH 2.5 15 min

    Preparación de la solución: Azul alcian (CI 74240) 1g + ácido acético al 3%, completar hasta 100 ml en agua destilada.

  • 8. 15 min en H2O destilada
  • 9.- 5-10 min en Hematoxilina de Mayer

    La hematoxilina no es un colorante en sentido estricto sino que es la hemateína, su producto oxidado, la que teñirá sustancias como la cromatina del núcleo y las grandes agregaciones ribosomales del citoplasma, como las que se dan en el retículo endoplasmático rugoso.

  • 10.- 15 min en agua corriente. Diferenciación.
  • 11.- 2x5 min en H2O destilada
  • 12.- 0.5 a 2 min en Eosina al 0.2 %

    La eosina, colorante ácido, se une a elementos del citoplasma y de la matriz extracelular.

    Se pueden usar tres tipos de eosina: eosina amarillenta (CI 45380), eosina azulada (CI 45400) y eosina soluble en alcohol (CI 45386). La primera es la más usada.

  • 13.- Tiempo variable en 70º para diferenciación

    El tiempo de diferenciación depende de la intensidad de tinción de eosina que queramos en nuestra muestra. Se le pueden añadir unas gotas de acético.

  • 14.- 5 min en etanol 96º
  • 15.- 2x10 min en etanol 100º
  • 16.- 2x10 min en xileno
  • 17.- Montado con medio de montaje
  • Resultados

    Citoplasma: rosado.
    Núcleos: negro.
    Hueso: azul intenso.
    Colágeno: azul pálido.
    Glándulas mucosas: azul intenso.
    Mastocitos: citoplasma azulado

    Consejos

    El pH del Azul alcián debe ser 2.5, comprobar siempre antes de usarlo.

    Hay que tener en cuenta la tinción con azul alcián es progresiva por lo que el tiempo de tinción se podrá ajustar a cada tejido. Por ejemplo, una coloración óptima para hueso puede ser de uno 10 minutos.

    Los fijadores ácidos dan mejores resultados para la eosina, mientras que los fijadores que contienen ácido pícrico favorecen una mejor tinción general. Los procesos de descalcificación provocan una pobre tinción nuclear.

    La eosina es muy soluble en agua. Una tinción excesiva se puede disminuir con lavados prolongados en agua.

    Si el xileno se vuelve lechoso tras la deshidratación es porque la deshidratación no ha sido completa. Se han de poner limpios el último alcohol de 100º y paso de xileno estropeado, y volver las secciones al alcohol de 50º y deshidratar de nuevo.

    Aunque la hematoxilina de Mayer es comúnmente usada, se pude cambiar por otros tipos de hematoxilina (ver recetas).

Productos
  • Xileno
  • Etanol de 50º, 70º, 80º, 90º, 96º y 100º
  • Azul alcián (CI 74240)
  • Hematoxilina de Mayer
  • Eosina acuosa al 0.2%
  • Ácido acético
  • H2O destilada
  • H2O corriente
  • Medio de montaje
Material
  • Cubetas de tinción
  • Cesta para portas
  • Cubreobjetos
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Secciones de hueso en la zona de la articulación teñidos con hematoxilina eosina más azul alcián. El cartílago articular (hialino) se puede distinguir claramente.
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