Atlas de histología vegetal y animal
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Técnicas histológicas. Protocolos.

TINCIÓN: HEMATOXILINA y EOSINA

La mayoría de las células y matrices extracelulares no poseen un color propio por lo que su observación directa al microscopio óptico no permite observar sus características morfológicas. Para poder observarlos se emplean colorantes, sustancias dotadas de color que se unen de manera más o menos específica a determinadas estructuras del tejido.

Hematoxilina
Hematoxilina

Las tinciones generales se usan habitualmente en los laboratorios de histología para obtener una visión general de las muestras de tejido. Normalmente combinan más de un colorante. La tinción más común es la que combina una sustancia como la hematoxilina y el colorante ácido eosina.

Procedimiento
  • Partimos de muestras que que han sido fijadas e incluidas en parafina. Estas muestras se han cortado en secciones de unas 8 µm y adheridas a portaobjetos recubiertos con gelatina.
  • 1.- 2x10 min en xileno para desparafinar
  • 2.- 2x10 min en etanol 100º
  • 3.- 10 min en etanol 96º
  • 4.- 10 min en etanol 80º
  • 5.- 10 min en etanol 50º
  • 6.- 5 min en H2O destilada
  • 7.- 5-10 min en Hematoxilina de Mayer

    La hematoxilina no es un colorante en sentido estricto sino que es la hemateína, su producto oxidado, la que teñirá sustancias como la cromatina del núcleo y las grandes agregaciones ribosomales del citoplasma, como las que se dan en el retículo endoplasmático rugoso.

  • 8.- 15 min en agua corriente. Diferenciación.
  • 9.- 2x5 min en H2O destilada
  • 10.- 0.5 a 2 min en Eosina al 0.2 %

    La eosina, colorante ácido, se une a elementos del citoplasma y de la matriz extracelular.

    Se pueden usar tres tipos de eosina: eosina amarillenta (CI 45380), eosina azulada (CI 45400) y eosina soluble en alcohol (CI 45386). La primera es la más usada.

  • 11.- Tiempo variable en 70º para diferenciación

    El tiempo de diferenciación depende de la intensidad de tinción de eosina que queramos en nuestra muestra. Se le pueden añadir unas gotas de acético.

  • 12.- 5 min en etanol 96º
  • 13.- 2x10 min en etanol 100º
  • 14.- 2x10 min en xileno
  • 15.- Montado con medio de montaje
  • Resultados

    Colágeno: rosa pálido.
    Músculo: rosa fuerte.
    Queratina: rojo intenso.
    Citoplasma: rosado.
    Núcleos: azul oscuro o púrpura (en realidad se tiñe sólo la cromatina).
    Eritrocitos: color cereza.

    Consejos

    Los fijadores ácidos dan mejores resultados para la eosina, mientras que los fijadores que contienen ácido pícrico favorecen una mejor tinción general. Los procesos de descalcificación provocan una pobre tinción nuclear.

    La eosina es muy soluble en agua. Una tinción excesiva se puede disminuir con lavados prolongados en agua.

    Si el xileno se vuelve lechoso tras la deshidratación es porque la deshidratación no ha sido completa. Se han de poner limpios el último alcohol de 100º y paso de xileno estropeado, y volver las secciones al alcohol de 50º y deshidratar de nuevo.

    Aunque la hematoxilina de Mayer es comúnmente usada, se pude cambiar por otros tipos de hematoxilina (ver recetas).

Productos
  • Xileno
  • Etanol de 50º, 70º, 80º, 90º, 96º y 100º
  • Hematoxilina de Mayer
  • Eosina acuosa al 0.2%
  • H2O destilada
  • H2O corriente
  • Medio de montaje
Material
  • Cubetas de tinción
  • Cesta para portas
  • Cubreobjetos


Tinción general de hematoxilina y eosina en cortes de parafina.



Hematoxilina-eosina

Secciones de parafina de 8 µm de grosor teñidas con hematoxilina y eosina. A) Vellosidades del intestino delgado. B) Detalle del epitelio del digestivo. C) Hepatocitos. D) Papila fungiforme de la lengua.
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