Atlas de histología vegetal y animal
Técnicas histológicas. Protocolos.

TINCIÓN de NISSL

La tinción de Nissl es una tinción usada comúnmente en secciones de tejido nervioso, aunque puede usarse para teñir ácido nucleicos en cualquier tejido. El colorante en el que se basa la tinción es normalmente el azul de toluidina o el violeta de cresilo. El más usado es el violeta de cresilo, que es el que se describe más abajo.

En el citoplasma de las neuronas aparecen unas estructuras fuertemente teñidas con esta tinción. Se denominan cuerpos de Nissl y se corresponden con cúmulos de retículo endoplasmático rugoso. Este orgánulo celular se tiñe con los colorantes básicos puesto que contiene una gran concentración de ribosomas y por tanto de ARNr y ARNm en proceso de traducción, siendo ambas moléculas ácidos nucleicos.

Procedimiento
  • Partimos de muestras fijadas con formaldehído (BOUIN o paraformaldheído) e incluidas en parafina.
  • 1.- 2x10 min en xileno para desparafinar
  • 2.- 2x10 min en etanol 100º
  • 3.- 10 min en etanol 96º
  • 4.- 10 min en etanol 80º
  • 5.- 10 min en etanol 50º
  • 6.- 5 min en H2O destilada
  • 7.- 5-10 min solución de violeta de cresilo al 0.1 %

    Hay varias maneras de preparar el violeta de cresilo:

    a) Solución de violeta de cresilo: 0.1 g de violeta de cresilo en 100 ml de agua destilada. Justo antes de usar se añaden unas gotas de ácido acético glacial y se filtra.
    b) 0.1 g de violeta de cresilo en 100 ml de agua destilada, más 0.25ml de ácido acético glacial. Disolver a 60 ºC hasta la disolución del violeta de cresilo. Guardar en oscuridad y filtrar antes de usar.
    c) Solución A: 0.6 ml de ácido acético en 100 ml de agua destilada; solución B: 1.36 g de acetato sódico en 100 ml de agua destilada. Mezclar las soluciones A y B en una proporción de 9 a 1 (9 de A y 1 de B) y ajustar el pH a 3.7. Mezclar violeta de cresilo al 1 % en agua destilada y tampón acetato en una proporción de 1:1. Filtrar y usar.

    En el caso de que sean secciones gruesas se puede usar la solución calentada a 37 ºC.

  • 8.- Lavado rápido en agua destilada.
  • 9.- Diferenciar en etanol de 96º durante varios minutos y comprobar el proceso con el microscopio.
  • 10.- 2x10 min en etanol 100º
  • 11.- 2x10 min en xileno
  • 15.- Montado con medio de montaje.
  • Resultados

    Núcleos: rosa - violeta.
    Retículo endoplasmático rugoso: púrpura.

    Consejos

    La calidad de la tinción depende del tiempo de diferenciación durante la deshidratación final, luego los tiempos en estos alcoholes afectarán al resultado final.

    Si se quiere que las gotas de lípidos o la mielina no interfieran con la tinción de los cuerpos celulares se pueden deshidratar en etanol creciente y volver a hidratar para eliminar tales lípidos.

Productos
  • Xileno
  • Etanol de 50º, 70º, 80º, 90º, 96º y 100º
  • Violeta de cresilo
  • Ácido acético
  • Acetato sódico
  • H2O destilada
  • Medio de montaje
Material
  • Cubetas de tinción
  • Filtro de papel
  • Probeta
  • Botes
  • Cesta para portas
  • Cubreobjetos
Corteza dorsal

Sección de corteza dorsal de ratón teñida con violeta de cresilo.
Médula espinal

Imagen de motoneuronas de la médula espinal de rata. Los grumos oscuros que aparecen en el citoplasma son los cuerpos de Nissl.