Atlas de histología vegetal y animal

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Técnicas histológicas. Protocolos.

TINCIÓN de NISSL

La tinción de Nissl es muy usada en secciones de tejido nervioso, aunque sirve para teñir ácido nucleicos en cualquier tejido. El colorante en el que se basa la tinción es normalmente el azul de toluidina o el violeta de cresilo. El más usado es el violeta de cresilo, que es el que se describe más abajo.

En el citoplasma de las neuronas aparecen unas estructuras fuertemente teñidas con esta tinción. Se denominan cuerpos de Nissl y se corresponden con cúmulos de retículo endoplasmático rugoso. Este orgánulo celular se tiñe con los colorantes básicos puesto que contiene una gran concentración de ribosomas y por tanto de ARNr y ARNm en proceso de traducción, siendo ambas moléculas ácidos nucleicos.

Procedimiento

Partimos de muestras fijadas con formaldehído (fijador Bouin o paraformaldheído) e incluidas en parafina.

1.- 2x10 min en xileno para desparafinar

2.- 2x10 min en etanol 100º

3.- 10 min en etanol 96º

4.- 10 min en etanol 80º

5.- 10 min en etanol 50º

6.- 5 min en H2O destilada

7.- 5-10 min solución de violeta de cresilo al 0.1 %.
Hay varias maneras de preparar el violeta de cresilo:
a) Solución de violeta de cresilo: 0.1 g de violeta de cresilo en 100 ml de agua destilada. Justo antes de usar se añaden unas gotas de ácido acético glacial y se filtra.
b) 0.1 g de violeta de cresilo en 100 ml de agua destilada, más 0.25 ml de ácido acético glacial. Disolver a 60 ºC hasta la disolución del violeta de cresilo. Guardar en oscuridad y filtrar antes de usar.
c) Tampón acetato: Solución A: 0.6 ml de ácido acético en 100 ml de agua destilada; solución B: 1.36 g de acetato sódico en 100 ml de agua destilada. Mezclar las soluciones A y B en una proporción de 9 a 1 (9 de A y 1 de B) y ajustar el pH a 3.7. Mezclar violeta de cresilo al 1 % en agua destilada y tampón acetato en una proporción de 1:1. Filtrar y usar.
En el caso de que sean secciones gruesas se puede usar la solución calentada a 37 ºC.

8.- Lavado rápido en H2O destilada.

9.- Diferenciar en etanol de 96º durante varios minutos y comprobar el proceso con el microscopio.

10.- 2x10 min en etanol 100º

11.- 2x10 min en xileno

15.- Montado con medio de montaje.

Resultados

Núcleos: rosa - violeta.

Retículo endoplasmático rugoso: púrpura.

Resultados

La calidad de la tinción depende del tiempo de diferenciación durante la deshidratación final, luego los tiempos en estos alcoholes afectarán al resultado final.

Si se quiere que las gotas de lípidos o la mielina no interfieran con la tinción de los cuerpos celulares se pueden deshidratar en etanol creciente y volver a hidratar para eliminar tales lípidos.

Productos

Xileno

Etanol de 50º, 70º, 80º, 90º, 96º y 100º

Violeta de cresilo

Ácido acético

Acetato sódico

H2O destilada

Medio de montaje

Material

Cubetas de tinción

Filtro de papel

Probeta

Botes

Cesta para portas

Cubreobjetos

Corteza dorsal
Sección de corteza dorsal de ratón teñida con violeta de cresilo.
Médula espinal
Imagen de motoneuronas de la médula espinal de rata. Los grumos oscuros que aparecen en el citoplasma son los cuerpos de Nissl.
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Actualizado: 29-07-2019. 13:27