Atlas de histología vegetal y animal
Técnicas histológicas. Protocolos.

TINCIÓN: PAS y HEMATOXILINA

Este método de tinción se emplea para detectar polisacáridos en tejidos, tanto glucógeno como mucopolisacáridos. También es una buena tinción para membranas basales y cartílago. Cualquier fijador es apropiado para esta técnica.

El mecanismo de coloración de la tinción de PAS no es como la de los colorantes habituales, sólo por afinidad eléctrica, sino que es una tinción histoquímica, es decir, se realiza inicialmente una modificación química al tejido previa a la coloración. Es el ácido peryódico quien lleva a cabo esta reacción.

Procedimiento
  • Partimos de muestras que que han sido fijadas e incluidas en parafina. Estas muestras se han cortado en secciones de unas 8 µm y adheridas a portaobjetos recubiertos con gelatina.
  • 1.- 2x10 min en xileno para desparafinar
  • 2.- 2x10 min en etanol 100º
  • 3.- 10 min en etanol 96º
  • 4.- 10 min en etanol 80º
  • 5.- 10 min en etanol 50º
  • 6.- 5 min en H2O destilada
  • 7.- Ácido peryódico al 0.5 % durante 5 min

    Se oxidan las uniones carbono-carbono de los azúcares para formar grupos aldehídos.

  • 7.- varios lavados en H2O destilada
  • 9.- Reactivo de Schiff durante 30 min en oscuridad (el tiempo depende de la temperatura)

    Los grupos aldehídos reaccionan con el reactivo de Schiff (ácido sulfuroso con fucsina) resultando en un color rojo fucsia. Las secciones quedan de un color rosado.

    Se puede dar un paso con una solución de metabisulfito potásico durante 2 minutos para eliminar los residuos de reactivo de Schiff de la muestra.

  • 10.- 5 min en agua corriente
  • 11.- Varios lavados en H2O destilada
  • 12.- 5 min en hematoxilina de Mayer
  • 13.- 15 min en agua corriente
  • 14.- 20 s en H2O destilada
  • 15.- 5 min en etanol 80º
  • 16.- 5 min en etanol 96º
  • 17.- 2x10 min en etanol 100º
  • 18.- 2x10 min en xileno
  • 19.- Montado con medio de montaje
  • Resultados

    Glúcidos: rosa intenso a fucsia
    Núcleos: azul oscuro (en realidad se tiñe sólo la cromatina)

    Consejos

    El tiempo en reactivo de Schiff depende de la temperatura. Incluso se puede teñir en microondas durante menos de un minuto.

    El reactivo de Schiff puede reutilizarse pero ha de conservarse en nevera y llevarlo a la temperatura deseada antes de su uso.

    El reactivo de Schiff debe conservar un color amarillento y hay que descartarlo si se vuelve de color rosado. Si aparece precipitado blanco en el fondo del bote de reactivo se puede disolver de nuevo.

Productos
  • Xileno
  • Etanol de 50º, 70º, 80º, 90º, 96º y 100º
  • Ácido peryódico al 5 %
  • Reactivo de Schiff
  • Hematoxilina de Mayer
  • H2O destilada
  • Agua corriente
  • Medio de montaje
Material
  • Cubetas de tinción
  • Cesta para portas
  • Cubreobjetos
Inmersión

Secciones de parafina de 8 µm de grosor teñidas con hematoxilina y eosina (A) y con PAS y hematoxilina (B). Las secciones pertenecen a campos similares del digestivo. La tinción de fucsia corresponde al reactivo de Schiff, el cual marca mucopolisacáridos de las células caliciformes.