Atlas de histología vegetal y animal
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Técnicas histológicas. Protocolos.

TINCIÓN

SAFRANINA O de JOHANSEN

VERDE RÁPIDO

Así como para observar tejidos animales es imprescindible usar colorantes que diferencien el núcleo del citoplasma, en el caso de los tejidos y órganos vegetales se usan colorantes con afinidad por las paredes celulares. La tinción vegetal por excelencia se caracteriza por usar la safranina, que presenta afinidad por las paredes lignificadas (paredes secundarias), y un segundo colorante que puede ser el azul alcián o en ocasiones el verde rápido, ambos con afinidad por las paredes celulósicas (paredes primarias). La safranina O de Johansen combinada con el verde rápido es una buena técnica para teñir tejidos vegetales y diferenciar entre paredes celulares primareias y secundarias.


Procedimiento
  • Partimos de muestras fijadas con FAA (formaldehído, alcohol, acético) e incluidas en parafina. Los cortes tendrán un grosor mínimo de 5 a 10 μm. También podemos teñir cortes gruesos obtenidos con vibratomo o microtomo de congelación, pero entonces hay que ajustar los tiempos.
  • 1.- 2x10 min en xileno para desparafinar
  • 2.- 2x10 min en etanol 100º
  • 3.- 10 min en etanol 96º
  • 4.- 10 min en etanol 80º
  • 5.- 10 min en etanol 50º
  • 6.- 5 min en H2O destilada
  • 7.- 24 h en safranina O de Johansen.

    Safranina O de Johansen
    2-metoxietanol (Etilen glicol monometil éter): 50 ml
    Etanol 100º: 25 ml
    H2O destilada: 25 ml
    Acetato sódico: 1 g
    Disolver
    Formol 37 % (formalina): 2 ml
    Safranina O (C.I. 50240): 1 g

  • 8.- 2 x 5 min en H2O destilada.
  • 9.- 10 s en etanol 96º + 0.5 % de ácido pícrico o ácido clorhídrico en agitación suave.
  • 10.- 10 s en etanol 96º + 4 gotas de hidróxido amónico en agitación suave.
  • 11.- 10 s en etanol 100º en agitación suave.

    La tinción con safranina es regresiva, luego la intensidad de color rojo se controla con los tiempos en los tres pasos anteriores. Si son demasiado largos la coloración se puede perder por completo.

  • 12.- 20 s en verde rápido con agitación sueve.

    Verde rápido
    2-metoxietanol (Etilen glicol monometil éter): 33,3 ml
    Etanol 100º: 33.3 ml
    Metil salicilato: 33.3 ml
    Verde rápido FCF (C.I. 42053): 0.05 g

  • 13.- 5 a 10 s en solución de aclarado diluida (usada) con agitación suave.

    Solución de aclarado diluida
    Solución de aclarado (ver más abajo): 50 ml
    Etanol 100º: 25 ml
    Xileno :25 ml

  • 14.- 10 s en solución de aclarado con agitación suave.

    Solución de aclarado
    Metil salicilato: 50 ml
    Etanol 100º: 25 ml
    Xileno :25 ml

  • 15.- 2x10 min xileno
  • 16.- Montado en medio de montaje.
  • Consejos

    El control de los tiempos tras los colorantes es fundamentales para una buena tinción.

    La safranina es una tinción regresiva luego el grado de tinción se controla con el tiempo de lavado en los alcoholes posteriores, mientras que el grado de coloración con verde rápido se consigue variando el tiempo en el propio colorante.

    Al ser conveniente una agitación suave en cada paso de aclarado, la tinción ha de hacerse individualmente a cada portaobjetos.

Productos
  • Xileno
  • Etanol de 50º, 70º, 90º y 100º
  • Acetato sódico
  • Safranina O (C.I. 50240)
  • Formol
  • 2-metoxi etanol
  • Verde rápido FCF (C.I. 42053)
  • Solución saturada de ácido pícrico
  • Hidróxido amónico
  • H2O destilada
  • Medio de montaje
Material
  • Cubetas de tinción
  • Pinzas
  • Portaobjetos
  • Cubreobjetos
  • Agitador magnético
  • Botes para almacén de soluciones
Safranina azul alcián

Corte en parafina teñido de una hoja de roble con safranina de Johansen-verde rápido.

Safranina azul alcián

Corte en parafina teñido de una hoja de roble con safranina de Johansen-verde rápido.

Safranina azul alcián

Corte en parafina teñido de una hoja de roble con safranina de Johansen-verde rápido.

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