Atlas de histología vegetal y animal

Técnicas histológicas. Protocolos.

TRICRÓMICO de GOMORI

Esta tinción se usa para destacar el tejido muscular y el tejido conectivo propiamente dicho.

Procedimiento
  • Protocolo puesto a punto por Elisa Inés Sánchez.
  • Partimos de muestras que que han sido fijadas en formol o Bouin e incluidas en parafina. Estas muestras se han cortado en secciones de unas 8 µm y adheridas a portaobjetos recubiertos con gelatina.
  • 1.- 2x10 min en xileno para desparafinar.
  • 2.- 2x10 min en etanol 100º
  • 3.- 10 min en etanol 96º
  • 4.- 10 min en etanol 80º
  • 5.- 10 min en etanol 50º
  • 6.- 5 min en agua destilada.
  • 7.- 1h líquido de Bouin a 56-60 ºC, o 24 h a temperatura ambiente

    La solución de Bouin actúa como mordiente.

  • 8.- Lavados en agua destilada hasta que desaparezca el color amarillo.
  • 9.- 10 min en hematoxilina de Weigert.

    Si la solución es vieja puede ser necesario incrementar el tiempo de tinción

  • 10.- 5 - 10 min en agua corriente.

    Si las muestras pierden su color o se tiñen débilmente, se puede volver a la Hematoxilina férrica de Weigert durante 5 minutos más. Se puede comprobar la tinción mirando por el microscopio.

  • 11.- 15 min en solución tricrómica.

    Solución tricrómica:
    0.6 g cromo2R (CI 16570).
    0.3 g verde luz (CI 42095).
    0.8 g ácido fosfotúngstico.
    1 ml ácido acético glacial.
    Hasta 100 ml de agua destilada.

  • 12.- 1 min en ácido acético al 1 %.

    Este es un paso de diferenciación. Si las muestras no están bien teñidas o no hay suficiente coloración roja en la muestra, dejarla más tiempo en la solución tricómica.

  • 13.- 30 s en agua destilada
  • 14.- 1 min en etanol 100º
  • 15.- 1 min en etanol 100º
  • 16.- 2 min en xileno
  • 16.- 3 min en xileno
  • 17.- Montado de las secciones
  • Resultados

    Colágeno: verde oscuro-celeste.
    Músculo: rojo.
    Citoplasma: rosado.
    Núcleos: negro.

    Consejos

    La Hematoxilina Férrica de Weigert como solución de trabajo no debe estar más de 10 días preparada, dado que pierde efectividad. También es recomendable filtrarla antes de ser utilizada, para evitar posibles artefactos.

    La solución tricómica debe tener un pH de 2, para una mejor tinción.

    La diferenciación con el ácido acético del 1% también se puede realizar en ácido acético al 0,5%, durante 1 min.

    La deshidratación final debe ser rápida para que no se pierda el colorante.

Productos
  • Xileno
  • Etanol de 50º, 70º, 80º, 90º, 96º y 100º
  • Hematoxilina de Weigert
  • Bouin
  • Cromo2R (CI 16570)
  • Verde luz (CI 42095)
  • Ácido fosfotúngstico
  • Ácido acético glacial
Material
  • Cubetas de tinción
  • Cesta para portas
  • Vasos de precipitado
  • Agitador magnético
  • Botes para colorantes
  • Cubreobjetos
Tricrómico de Gomori
Tricrómico de Gomori

Secciones de parafina de 8 µm de grosor teñidas teñidas con tricrómico de Gomori, en oreja de rata.
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