Atlas de histología vegetal y animal
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Técnicas histológicas. Protocolos.

TINCIÓN

TRICRÓMICO de VAN GIESON

Es una tinción donde se combina la tinción nuclear mediante la hematoxilina férrica de Weigert con la mezcla ácido pícrico-fucsina ácida, la cual permite diferenciar cromáticamente las fibras colágenas del tejido conjuntivo.

Procedimiento
  • Cualquier fijador es válido para esta tinción. Las muestras se incluyen en parafina y se cortan en secciones de unas 8 μm que se adhieren a portaobjetos recubiertos con gelatina.
  • 1. 2x10 min en xileno para desparafinar.
  • 2. 2x10 min en etanol 100º
  • 3.- 10 min en etanol 96º
  • 4. 10 min en etanol 80º
  • 5. 10 min en etanol 50º
  • 6. 5 min en H2O destilada
  • 7. 10 min en hematoxilina férrica de Weigert (este colorante está formado por dos soluciones que se mezclan en el momento de la tinción. (Para su preparación ver aquí).
  • 8. 5 min en H2O corriente
  • 9. 1 min en H2O destilada
  • 10. 4 a 5 min con picrofucsina de Van Gieson.

    Picrofucsina de Van Gieson

    Solución A. Fucsina ácida 1%.
    1 g de fucsina ácida (C.I. 75290).
    100 ml de H2O destilada
    Solución B. Solución acuosa saturada de ácido pícrico.
    Solución de trabajo.
    1 ml de solución A.
    45 ml de solución B.

    La solución de trabajo se realiza en el momento de la tinción aunque se puede dejar madurar unas semanas. Según el caso el tiempo de tinción puede variar. De cualquier manera, antes de su uso se le agregan 0.25 ml de ácido clorhídrico concentrado. Tras la coloración con esta mezcla no se debe lavar con agua normal ya que ocasiona una coloración más débil, y es por ello que se recomienda usar el agua acidificada.

  • 11. 2 x 30 s en H2O acidificada.

    Preparación del H2O acidificada:
    0.5 ml de ácido acético
    100 ml de H2O destilada

  • 12. 3 x 1min en etanol 100º
  • 13. 2 x 5 min en xilol.
  • 14. Montado con medio de montaje.
  • Resultados

    Colágeno: rojo rosado.
    Músculo: amarillo anaranjado.
    Citoplasma: amarillo anaranjado.
    Núcleos: negro azulado.

Productos
  • Xileno
  • Etanol de 50º, 70º, 80º, 90º, 96º y 100º
  • Hematoxilina de Weigert
  • Fucsina ácida (C.I. 75290)
  • Ácido pícrico
  • Ácido acético
  • Ácido clohídrico
  • H2O destilada
  • H2O corriente
  • Medio de montaje
Material
  • Cubetas de tinción
  • Cesta para portas
  • Cubreobjetos
Tricrómico de Van Gieson

Sección de 8 µm de grosor de una muestra incluida en parafina teñida con tricrómico de Van Gieson. Zona profunda de la dermis.