Atlas de histología vegetal y animal

Técnicas histológicas. Protocolos.

TINCIÓN

AZUL de TOLUIDINA

El azul de toluidina es un colorante que se usa para tinciones rápidas en histología vegetal. Es muy fácil de preparar y el tiempo de tinción es muy corto. Además, produce una reacción metacromática, es decir, es capaza de dar color diferente a diferentes estructuras. El color va desde verde brillante hasta púrpura, pasando por una gama de azules.

Las tinciones generales para tejidos vegetales se usan habitualmente en los laboratorios de histología para obtener una global de la calidad de las muestras de tejido y de las estructuras que contienen. Aunque en este casos se usa un solo colorante, suelen combinar más de uno, como la tinción de safranina-azul alcián.

Procedimiento
  • Partimos de muestras que que han sido fijadas e incluidas en parafina. Estas muestras se han cortado en secciones de unas 8 µm y adheridas a portaobjetos recubiertos con gelatina.
  • 1.- 2x10 min en xileno para desparafinar
  • 2.- 2x10 min en etanol 100º
  • 3.- 10 min en etanol 96º
  • 4.- 10 min en etanol 80º
  • 5.- 10 min en etanol 50º
  • 6.- 5 min en H2O destilada
  • 7.- 30 s en azul de toluidina 0,5 % en H2O destilada
  • 8.- 3x10 s en H2O destilada con agitación
  • 9.- 10 s en etanol 96º con agitación
  • 10.-2 x 10 s en etanol 100º con agitación
  • 11.- 2 min + 5 min en xileno
  • 12.- Montado con medio de montaje
  • Resultados

    Paredes celulares primarias delgadas: azul a púrpura.
    Paredes celulares secundarias: verde brillante.
    Cutícula madura: verde brillante.

    Consejos

    Quizá lo más importante es la rapidez con se hacen los pasos que van tras el colorante y hasta el segundo paso de xileno. Es conveniente hacer los portaobjetos uno a uno y agitándolo lentamente con la mano como si se estuviera removiendo un líquido con una cucharilla en la que el portaobjetos hace de cuchara, o sumergiendo y sacando el portaobjetos de la solución.

Productos
  • Xileno
  • Etanol de 50º, 70º, 80º, 90º, 96º y 100º
  • Azul de toluidina al 0.5 % en H2O destilada
  • H2O destilada
  • Medio de montaje
Material
  • Cubetas de tinción
  • Cesta para portas
  • Cubreobjetos
Azul de toluidina

Sección de una espina de un tojo. Nótese el colo verde brillante en la cutícula y el azul claro de las fibras de esclerénquima, mientras que las paredes de las células parenquimáticas aparecen de color púrpura-violeta.

Azul de toluidina Azul de toluidina

Secciones de azul de toluidina, derecha, y safranina-azul alcián, izquierda. Planta: tojo.