Atlas de histología vegetal y animal

Técnicas histológicas. Protocolos.

TINCIÓN de WOELCKE

Esta tinción se usa para teñir la mielina del sistema nervioso central, aunque no sirve para la del sistema nervioso periférico. Es útil en estudios de alteraciones de los tractos nerviosos o del tejido nervioso en general. También se emplea en casos de muerte celular puesto que las neuronas degeneradas aparecen completamente negras, mientas que en las normales sólo se tiñe el núcleo.

Procedimiento
  • Partimos de muestras que que han sido fijadas en formol o Bouin e incluidas en parafina. Estas muestras se han cortado en secciones de unas 8 µm y adheridas a portaobjetos recubiertos con gelatina.
  • 1.- 2x10 min en xileno para desparafinar.
  • 2.- 2x10 min en etanol 100º
  • 3.- 10 min en etanol 96º
  • 4.- 10 min en etanol 80º
  • 5.- 10 min en etanol 50º
  • 6.- 5 min en agua destilada.
  • 7.- 16-18 h en solución de sulfato férrico amónico al 2.5 % en agua destilada.

    Solución de sulfato férrico amónico 2.5 g en 100 ml de agua destilada. Hay que usar el mortero para triturar y disolver bien los cristales y asegurarse de que tiene un color violáceo.

  • 8.- 1.5 a 2 h en solución de trabajo de hematoxilina.

    (a) Hematoxilina alcohólica: 10 g de hematoxilina en 100 ml de etanol de 100º.
    (b) Solución saturada de carbonato de litio: 1.45 g de carbonato de litio en 99 ml de agua destilada.

    Solución de trabajo de hematoxilina: 45 ml de agua destilada + 10 ml de (a) + 7 ml de (b) + 45 ml de agua destilada.

    Preparar la solución de trabajo de hematoxilina siguiendo el orden indicado. Es importante no agitar para mezclar los 4 componentes. Esta solución se puede usar durante una semana aproximadamente.

  • 9.- Etanol de 80º hasta aclarar el fondo. El tiempo depende del proceso de aclarado del color de la tinción.
  • 10.- 5 min en etanol 96º
  • 11.- 2x10 min en etanol 100º
  • 12.- 2x10 min en xileno.
  • 13.- Montado con medio de montaje.
  • Resultados

    Glía y nucléolo: negros.
    Vainas de mielina: azul oscuro.
    Neuronas en degeneración: soma negro.
    Fondo: claro.

    Consejos

    Es importante no sobreteñir con la hematoxilina puesto que se tendría una tinción de fondo muy oscura que oculta la mielina.

    Los tiempos en los alcoholes puede variar para conseguir la tinción deseada, sobre todo el etanol de 80º tras la solución de trabajo de hematoxilina.

Productos
  • Xileno
  • Etanol de 50º, 70º, 80º, 90º, 96º y 100º
  • Hematoxilina cristalizada (C.I. 75290)
  • Sulfato férrico amónico
  • Carbonato de litio
  • Medio de montaje
Material
  • Cubetas de tinción
  • Cesta para portas
  • Mortero
  • Cubreobjetos
Hematoxilina-eosina

Secciones de parafina de 8 µm de grosor teñidas con la el protocolo de Woelcke, usado para resaltar las vainas de mielina en un cerebro de rata.