Atlas de histología vegetal y animal

Técnicas histológicas. Protocolos.

FIJADOR PLP
(peryodato, lisina, formaldehído)

Los fijadores son moléculas o mezclas de moléculas en solución que se usan para preservar las características tisulares lo más parecido posible a su estado vivo. Permiten que las muestras de tejidos sean conservadas o procesadas en las diversas técnicas histológicas sin deteriorarse. Existen multitud de fijadores, cada uno con características propias, y se eligen en función del tratamiento posterior o de lo que queramos poner de manifiesto.

La solución fijadora PLP (peryodato, lisina, formaldehído) se emplea cuando se quiere una alta preservación de antígenos puesto que su principal capacidad de fijación se centra en los carbohidratos. Contiene peryodato sódico que oxida a los azúcares para formar aldehídos y la lisina forma puentes entre ellos, produciendo la fijación. El paraformaldehído se usa en bajas concentraciones para estabilizar el tejido. Es un fijador que, además de preservar la antigenicidad, mantiene la estructura de las membranas en unas condiciones tan buenas que se puede usar como fijador para muestras destinadas a microscopía electrónica.

Procedimiento
  • Preparación de solución A: a una solución de lisina-HCl 0.2 M se le añade fosfato disódico dibásico 0.1 M hasta que el pH sea 7.4. La solución se diluye en tampón fosfato sódico 0.1 M pH 7.4 hasta que la concentración de lisina-HCl alcance 0.1 M.
  • Preparación de solución B: paraformaldehído al 8 % en H2O destilada.
  • Preparación de solución fijadora: mezclar 3 partes de la solución A con 1 de la solución B y añadir metaperyodato sódico sólido hasta alcanzar una concentración final del 0.01M
  • Soluciones

    Lisina-HCl: solución 0.2 M en H2O destilada.

    Fosfato disódico dibásico: solución 0.1 M en H2O destilada.

    Tampón de fosfato sódico: solución 0.1 M en H2O destilada, pH 7.4.

    Paraformaldehído: solución al 8 % en H2O destilada.

    Consejos

    Es importante añadir los productos y soluciones en el orden indicado.

Productos
  • Lisina-HCl
  • Fostato disódico dibásico (Na2HPO4)
  • Tampón fosfato sódico
  • Paraformaldehído
  • Metaperyodato sódico (NaI04)
  • Agua destilada
Material
  • Probeta
  • Balanza
  • Medidor de pH
  • Agitador magnético / placa térmica
  • Vasos de precipitado
  • Botellas con cierre hermético

Bibliografía

Brenes F, Harris S, Paz MO, Petrovic LM, Scheuer PJ 1986. PLP fixation for combined routine histology and immunocytochemistry of liver biopsies. Journal of clinical pathology 39: 459-563.