Atlas de histología vegetal y animal


Técnicas histológicas. Protocolos.

FIJADOR

PARAFORMALDEHÍDO TAMPONADO

El formaldehído es el fijador por excelencia en la mayoría de las técnicas histológicas. Se emplea como formol (formaldehído al 10%) en fijadores como el Bouin, el FFA o PLP, o sólo como formaldehído al 4 % tamponado. Es recomendable el uso de formaldehído preparado fresco para evitar su oxidación. Por ello, actualmente es frecuente usar fijadores con formaldehído al 4 % tamponado preparado a partir paraformaldehído. El paraformaldehído es un polímero de formaldehído que se obtiene sólido y que se disuelve para obtener la solución de trabajo.

Paraformaldehído 4 %
  • Paraformaldehído
  • Tampón fosfato 0.4 M pH 7.4
  • Hidrixido sódico 10 N
  • Agua destilada
  • 4 g
  • 25 ml
  • unas gotas
  • hasta 75 ml
  • Preparación. Para 100 ml.

    1. Calentar 60-70 ml de agua a 60 ºC en un matraz con un agitador magnético.
    2. Añadir 4 g de paraformaldehído.
    3. Añadir dos o tres gotas de hidróxido sódico 10 N.
    4. Esperar a que la solución se vuelva transparente.
    5. Filtrar.
    6. Añadir 25 ml de tampón fosfato 0.4M pH 7.4
    7. Enrasar con agua destilada hasta 100 ml.
    8. Enfriar a 4-10 ºC antes de usar.

    El resultado es 100 ml de formaldehído al 4% en tampón fosfato 0.1M pH 7.4.

    Consejos

    El formaldehído preserva los lípidos pero es mucho más efectivo cuando se añaden iones de calcio a la solución. El calcio disminuye la disolución de los fosfolípidos.

    El formaldehído no reacciona con los carbohidratos y por ello se pueden perder cantidades importantes de glucógeno y glicosaminoglicanos.

    El formaldehído tamponado se puede usar para tejidos destinados a su observación con microscopía electrónico cuando se le añade glutaraldehído (0.5-3%). En algunos casos se le puede añadir también ácido pícrico.

    La calidad de la tinción se puede mejorar mediante la adición de lisina (ver fijador PLP), ciclohexilamina o fenol, con lo que se pueden conseguir calidades de tejido similares a las aportadas por el glutaradehído.

    Se pueden emplear soluciones de paraformaldehído con ligeras variaciones y secuencialmente. Por ejemplo, se ha recomendado una fijación inicial de 4 % de paraformaldehído con 2 % fenol a pH 7, seguida por una fijación con los mismos componentes pero con pH 5.5.

Productos
  • Paraformaldehído
  • Cloroformo
  • Hidróxido sódico 10 N
  • Tampón fosfato 0.4 M pH 7.4
  • Agua destilada
Material
  • Probeta
  • Embudo
  • Filtro papel
  • Agitador magnético
  • Agitador con plancha calefactora


Preparación de fijador paraformaldehído tamponado con glutaraldehído y ácido pícrico.